溶液的配制
1、稀释抗体溶液:将抗体浓缩液摇匀,用缓冲液10倍稀释抗体浓缩液,现用现配。
2、稀释酶结合物:将酶结合物浓缩液摇匀,用缓冲液10倍稀释酶结合物浓缩液,现用现配。
3、底物溶液的配制:用底物缓冲液10倍稀释底物浓缩液,根据需要的量现用现配,底物溶液变蓝禁止使用。
七、样品的前处理方法:
牛奶:新鲜牛奶或解冻牛奶50µL,加水950µL,1:20稀释,作样品液备用。
八、检测步骤:
1、剪开锡箔袋,按每个标准液和样品提取液2孔计算所需微孔板条的数量,插入框架。
2、各取系列标准液和样品液20µL分别加到其对应微孔中,每个标准和样品加双孔。
3、每孔加稀释好的酶结合物20µL。
4、每孔加稀释好的抗体100µL,在MicBio-IV微孔板恒温振荡器上*混匀,用封口膜封好,室温孵育30分钟。
5、倒出孔内液体,在吸水纸上拍打,使孔中没有残留的液体。使用多道移液器,每孔加水250µL,再倾倒干净。如此洗板,重复三次。
6、每孔加底物溶液100µL,室温避光孵育30分钟。
7 、每孔加终止液100µL,混匀。
8 、在450nm波长处测吸光度值。60分钟内读数。