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注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法确认

发布时间:2010-02-06   点击次数:2591次

摘要】  目的:建立注射用炎琥宁细菌内毒素检查方法。方法:按《中国药典》2005年版(二部)附录收载的细菌内毒素检查方法及指导原则进行实验。结果:注射用炎琥宁经1→40倍稀释后对鲎试剂无干扰作用。结论:细菌内毒素检测方法可用于注射用炎琥宁的热原检查。

【关键词】  细菌毒素 鲎试剂 炎琥宁 HtPot10恒温金属浴

     注射用炎琥宁具有清热、解毒、抗炎的功能,临床应用于病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染。临床用药广泛,又常用于静脉滴注,现标准为进行热原检查[1],由于细菌内毒素检查具有灵敏度高,操作简便,重现性好的优点。现将细菌内毒素法代替热原检查法。

    1  仪器与试剂

混匀器;HtPot10恒温金属浴(合肥艾本森科学仪器有限公司);无热原吸头,微量移液器。

    细菌内毒素工作品(CSE,效价70EU/支,批号20053,中国药品生物制品检定所);鲎试剂(TAL,灵敏度0.125EU/ml,批号051109,050210,湛江安度斯生物有限公司);细菌内毒素检查用水(批号200050208,含量≤0.03EU/ml,湛江海洋生物制品检定厂);注射用炎琥宁(供试品,规格每支0.2g,批号051209、0501018、050926,哈尔滨三联药业有限公司)。

    2  方法与结果

    2.1  鲎试剂灵敏度(λ)复核  按细菌内毒素检查法[2],用BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0.5、0.25λ4个浓度进行实验。结果表明,灵敏度为0.125EU/ml的鲎试剂符合规定。见表1。将表1数据代入公式λc=lg-1∑xini  λc=0.125。表1  鲎试剂灵敏度复核实验结果TAL内毒素浓度(EU/ml)0.250.1250.06250.03125灵敏度(λc)051109++--0.125050210++--0.125

  2.2  注射用炎琥宁细菌内毒素限值(L)的确定  L=K/M,式中K为规定的给药途径,人用每千克体重每1h可接受的内毒素zui大剂量,注射剂的K=5.0EU/kg·h;M为人用每千克体重每1h给药的zui大剂量,经计算,供试品M=1.0ml/kg·h,因此细菌内毒素理论限值为:L=K/M=5/1.0=5EU/ml。

    2.3  供试品的zui大有效稀释倍数(MVD)  选用灵敏度为0.125EU/ml鲎试剂时,MVD=Lλb=50.125=40倍。

    2.4  供试品干扰初筛试验  用BET水将注射用炎琥宁(批号051209)分别稀释成原液、1→10、1→20、1→40系列浓度,以各稀释浓度供试品将细菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0.5、0.25λb4个浓度的内毒素溶液,与鲎试剂混合进行抑制/增强试验,结果表明,供试品在较高浓度时对鲎试剂有干扰作用,之外,其直接毒性作用可刺激心血管、肝脏等脏器与功能,是导致肝细胞局灶或弥漫性坏死的主要原因。肝细胞可出现局灶或弥漫性坏死,门脉周围纤维化。在供试品至少1→40稀释后则对鲎试剂无干扰作用,

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